高分外泌体研究利器：Digital Western！

面对生物制药的百“抗”齐放，细胞和基因治疗的如火如荼，外泌体仿佛一匹突出重围的黑马吸引着来自资本、科研、临床转化和产业化的目光。外泌体几乎可以在所有体液（血液、唾液、尿液、乳汁、脑脊液、精液）中找到，可通过循环系统送达到其他组织和细胞，产生调控作用，参与细胞代谢、肿瘤发生、免疫调节、神经系统疾病等生理和病理活动。因此，广泛地被应用于Biomarker研究、药物治疗载体、疾病早期筛查和诊断。

目前，最常用的外泌体鉴定和表征三部曲，是基于对外泌体的形态学、粒子大小（粒径）和表面标志物的技术手段。形态学检测中，最常用透射电镜(TEM)和低温电子显微镜(cryo-EM)。粒径大小检测，广泛采用纳米粒子跟踪分析技术(NTA)对外泌体粒径分布作出分析。国际细胞外囊泡协会在2014年发表指导手册，建议鉴定外泌体需要通过免疫印迹方法鉴定EV表面标志物。

然而，利用劳动密集型的传统Western Blot（WB）技术进行鉴定和表征外泌体标志物，存在诸多局限：样品用量多、检测时间长、步骤冗长、人为操作引入过多误差，最终导致数据质量低！

全自动Digital Western技术平台的横空出世，一扫传统Western带给广大科学家的阴霾，每一天都是做WB的良辰吉日，让您从此享受WB！节省出大量宝贵时间去专注于阅读、思考、交流、仰望天空、参与社团、思考人性等更有价值的事务。

全自动Digital Western检测全流程

（上样后，剩下的一切都交给她，一顿晚饭的功夫拿到结果）

Digital Western外泌体研究核心价值：

超微量样本：每个样品仅需3 μl，利用传统WB几分之一到十几分之一样本量，实现微量外泌体蛋白质标志物检测；

定量精准：利用内参蛋白或总蛋白归一化，进行可重复性精准定量，也可利用标准品进行绝对定量；

全自动快速：24个样品检测仅需3 h，快速获得实验结果，发表文章；

多重蛋白质检测：可采用化学发光和荧光模式，实现多重蛋白质同步检测；

国内外行业领先机构利用全自动Digital Western(也称为Simple Western)进行外泌体标志物鉴定和表征，做出了很多创新性成果和发表了高影响文章。

案例赏析：

外泌体治疗产业化头部的玩家之一：美国Codiak BioSciences公司

2021年，来自Codiak公司的科学家，在Molecular Therapy（IF：11.45）中发表文章：A versatile platform for generating engineered extracellular vesicles with defined therapeutic properties.

使用ProteinSimple全自动Digital Western对外泌体进行表征，检测如下蛋白：

外泌体标志物：传统标志物四次穿膜蛋白（CD9、CD63、CD81）和SDCBP

大低聚复合物蛋白：LGALS3BP

内质网蛋白：CANX

深圳市第二人民医院李维平团队联合中国科学院大学化学工程学院魏炜团队

2022年3月，深圳市第二人民医院李维平团队联合中国科学院大学化学工程学院魏炜团队共同发表题为“Exploration and functionalization of M1-macrophage extracellular vesicles for effective accumulation in glioblastoma and strong synergistic therapeutic effects”于Signal Transduction and Targeted Therapy期刊（IF：18.19）。

研究人员利用全自动Digital Western检测M1巨噬细胞和M1EV中CD9、CD81、ALIX、TSG101、iNOS、F4/80和GAPDH的蛋白水平（如上图b所示）。

中科院过程所魏炜团队，联合上海交大医学院附属同仁医院等多家单位

2021年来自中科院过程所魏炜团队，联合上海交大医学院附属同仁医院等多家单位，共同发表题为“In situ growth of nano-antioxidants on cellular vesicles for efficient reactive oxygen species elimination in acute inflammatory diseases”于Nano Today 期刊（IF：20.72）。

研究人员利用全自动Digital Western检测外泌体 Marker（CD9）、外泌体和红细胞Marker（TSG101、HSP70）以及MSC生长因子（HGF）（如上图c所示），每个样品仅需3μL。

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解放双手，从此爱上WB，告别实验Emo！

参考文献：

R. Kalluri, V. S. LeBleu, The biology, function, and biomedical applications of exosomes. Science 367, eaau6977 (2020).
K. Dooley, R. E. McConnell, K. Xu, et al. A versatile platform for generating engineered extracellular vesicles with defined therapeutic properties. Mol. Ther. 29, 1729–1743 (2021).
Wang, X., Ding, H., Li, Z. et al. Exploration and functionalization of M1-macrophage extracellular vesicles for effective accumulation in glioblastoma and strong synergistic therapeutic effects. Sig Transduct Target Ther 7, 74 (2022).
Jiawei Zhao, Yugang Wang, et al. In situ growth of nano-antioxidants on cellular vesicles for efficient reactive oxygen species elimination in acute inflammatory diseases, Nano Today, Volume 40, (2021).
Shao, Huilin et al. New Technologies for Analysis of Extracellular Vesicles. Chemical reviews vol. 118,4 (2018).
Tian Y, Zhang F, Qiu Y, et al. Reduction of choroidal neovascularization via cleavable VEGF antibodies conjugated to exosomes derived from regulatory T cells. Nat Biomed Eng. (2021).